利来国际推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具备多项显著特性：

产品特点

1. 即开即用：用户仅需提供样品DNA模板，无需复杂准备。
2. 高灵敏度：引物和其他组分经过优化，确保高效敏感的检测性能。
3. 阳性对照提供：便于有效区分假阴性样品，提升结果准确性。
4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。
5. 定性与定量检测：该产品支持定性和定量两种检测方式，定量检测时的线性范围可达至少5个数量级。
6. 经济实用：本产品足以进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 科研专用：本检测试剂盒仅供科研使用，确保专业性。

使用方法

本部分介绍样品准备及检测过程：

1. DNA提取

使用用户自选的方案提取和纯化样品DNA，兼容市场上大多数核酸提取试剂盒。

2. 稀释标准曲线样品

（为避免污染，以下稀释操作应在独立区域进行。）
1. 标记6个离心管，编号7、6、5、4、3、2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（1×10E8拷贝/μL），震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放在冰上待用。
4. 将样品逐步稀释，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品，冰上保存。如果不需要制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

3. 试剂配制

依据N个待检样品，准备N+2个qPCR管，向每个PCR管中加入相应成分，具体配制方法请参考详细说明书。

4. 添加模板

分别向qPCR管中加入2μL的模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待检测样品、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后立即进行扩增反应。

5. 扩增反应

将PCR管放置于扩增仪器中，设置扩增程序（具体见说明书）。

6. 结果分析

如果制作了标准曲线，使用阳性对照的浓度log值为横轴，Ct值为纵轴绘制曲线；如果未制作标准曲线，依据以下标准判定结果：
- 阳性对照Ct值应<30，且具明显的指数增长。
- 阴性对照Ct值应为38或无Ct值，无显著指数增长与平台期。
- 样本检测：Ct值<35则结果为阳性；Ct值为38或无值则为阴性；Ct值在35-38时应复检，若重复结果仍在此范围且有显著指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

本产品需低温运输，并在-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照应单独放置，以避免污染其他试剂。